Роль ДНК-диагностики в контроле и элиминации рецессивных наследственных аномалий у сельскохозяйственных животных – тема научной статьи по животноводству и молочному делу читайте бесплатно текст научно-исследовательской работы в электронной библиотеке КиберЛенинка

Роль ДНК-диагностики в контроле и элиминации рецессивных наследственных аномалий у сельскохозяйственных животных – тема научной статьи по животноводству и молочному делу читайте бесплатно текст научно-исследовательской работы в электронной библиотеке КиберЛенинка Реферат

Генетические аномалии у сельскохозяйственных животных

Название: Генетические аномалии у сельскохозяйственных животных

Вид работы: курсовая работа

Рубрика:Ботаника

Размер файла: 29,88 Kb

Скачать файл:referat-zona.ru-22917.docx

Краткое описание работы: Ветеринарная селекция в разведении сельскохозяйственных животных. Генетические аномалии и устойчивость свиней, овец и птиц к некоторым болезням. Роль мутаций и рекомбинаций генов в возникновении патологии у животных. Хромосомные аберрации у свиней.

1. ВЕТЕРИНАРНАЯ СЕЛЕКЦИЯ В РАЗВЕДЕНИИ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ

Благодаря целенаправленной селекции, проводившейся в последние десятилетия, значительно повысился генетический потенциал животных по многим хозяйственно полезным признакам. Вместе с тем все чаще возникают проблемы, связанные с плодовитостью животных и резистентностью их к болезням. Опыт показывает, что эти проблемы невозможно решить только за счет улучшения кормления, технологии содержания или средствами ветеринарной терапии. На практике фармацевтические средства и препараты, повышающие иммунитет, очень часто оказываются недостаточными для лечения и профилактики болезней.

Результаты исследований советских и зарубежных ученых подтверждают немаловажное значение наследственности в проявлении резистентности или восприимчивости животных к определенным болезням, устойчивости к неблагоприятным факторам внешней среды. Известный ветеринарный генетик Ф. Б. Хатг, подчеркивая значение генетической профилактики болезней, отмечал, что внутри вида находятся индивидуумы, способные жить с возбудителями болезни, в то время как другие заболевают. Он считал, что в результате накопления благоприятно действующих генов резистентных индивидуумов можно создать резистентные к болезням линии и породы.

В настоящее время используются генетические методы для поиска и анализа причин, обусловливающих снижение уровня воспроизводительной функции и жизнеспособности, распространение аномалий, а также ведется разработка научно обоснованной системы их профилактики.

Установлено, что многие формы патологии животных имеют генетическую основу и связаны с мутациями и рекомбинациями наследственного материала — генов и хромосом.

1.1 Роль мутаций и рекомбинаций генов в возникновении патологии у животных

Мутации, представляющие собой стойкие изменения в структуре ДНК, хромосом и количественном составе кариотипа, постоянно и с определенной частотой возникают в популяциях животных.

Фенотипически мутации нередко проявляются в формах врожденных уродств (аномалий), в смертности, снижении жизнеспособности и устойчивости к болезням, нарушении воспроизводительной функции. В популяциях сельскохозяйственных животных в процессе длительного их существования накоплен определенный груз вредных рецессивных мутаций и аберраций хромосом. Для профилактики распространения вредных мутаций необходима прежде вcero организация учета всех форм патологии животных.

Генетический контроль (мониторинг) вредных мутаций должен включать тщательный клинический анализ болезней и уродств, экспертизу происхождения аномальных животных, выяснение роли наследственности в их этиологии. Значение проблемы генетического мониторинга в современном животноводстве связано с рядом обстоятельств. Так, в связи с использованием искусственного осеменения постоянно сокращается число производителей; следовательно, степень влияния каждого из них на генофонд стада, распространение наследственных дефектов значительно увеличилась. Поэтому особо важное значение при организации крупномасштабной селекции приобрела оценка генотипов быков, хряков, баранов, используемых в интенсивном воспроизводстве. Контроль воспроизводительных способностей производителей общепринятыми методами по качеству потомства не дает полных сведений о возможности генетического влияния их на оплодотворяемость, эмбриональную смертность, рождение аномального и нежизнеспособного, подверженного заболеваниям плода. Ситуация осложняется тем, что большинство аномалий и уродств — это рецессивно наследуемые генные мутации, фенотипически проявляющиеся только в гомозиготном состоянии. Наследуемые хромосомные аномалии фенотипически проявляются лишь у взрослых дочерей производителей в виде гибели эмбрионов.

Для проверки производителей на носительство скрытых генетических дефектов и элиминации их из воспроизводства необходимы регистрация всех случаев уродств и аномалий, контроль состояния структуры и функции хромосом.

Организация мониторинга в животноводстве позволяет контролировать уровни мутагенов в окружающей среде, их влияние на хромосомный аппарат, рост, развитие и продуктивность животных, осуществлять профилактику распространения генетической патологии.

Известно, что генетический груз популяций животных представлен широким спектром не только генных мутаций, но и аберраций хромосом, которые подразделяются на количественные изменения в кариотипе — анеуплоидию (полиплоидия, гиперплоидия, гипоплоидия) и структурные перестройки (транслокация хромосом, инверсии, делеции, нехватки, дупликации и др.). Избыток или недостаток хромосом у индивидуума, как правило, приводит к его гибели еще в эмбриональную стадию развития. Исключения составляют носители моносомии, трисомии и некоторых других вариантов анеуплоидии по половым хромосомам, которое выживают, но являются бесплодными.

Живые носители структурных перестроек хромосом имеют выраженных фенотипических отклонений. Однако в гаметогенезе у них формируются половые клетки с несбалансированным набором хромосом, дающие начало нежизнеспособным эмбрионам, что является причиной снижения уровня воспроизводительной функции. Эти аберрации, являясь сбалансированной частью хромосомных мутаций, передаются по наследству.

1.2 Особенности распространения генетических аномалий животных

В современных условиях разведения животных, когда генотип производителя за короткое время может быть репродуцирован тысячами его потомков, ущерб от рождения аномального приплода, снижения его плодовитости и жизнеспособности может быть больше улучшающего эффекта по продуктивности, если производитель является носителем вредных генов или аберраций хромосом.

При использовании в разведении быков, содержащих в кариотипе вредные гены, их самих, а также их сыновей и внуков частота генетической аномалии быстро возрастает. Например, в костромской породе интенсивно использовали быка Бурхана 6083, в потомстве которого было зарегистрировано несколько типов уродства (укорочение нижней челюсти, мопсовидность и пучеглазие, водянка, слепота, уродства конечностей и др.). В результате, если частота этих аномалий в приплоде Бурхана составила 4,87 %, то у его внука быка Жетона 3501 уже 17,3 % потомков имели уродства головы.

Анализ 14 линий костромского скота (Жигачев А. И., 1986) выявил большое число уродств в линии Ладка. Причиной такого явления обычно служит насыщение родственной группы животных (линии) рецессивными мутациями при отсутствии браковки гетерозиготных по вредным генам животных.

Влияние дрейфа генов, усиление концентрации вредного аллеля возрастают при повышении нагрузки на одного производителя. Скорость протекания генетико-автоматических процессов (дрейфа) зависит от эффективной численности популяций. Для определения последней используют формулу Ne = 4NfNm/Nf Nm, где Ne— эффективная численность популяции; Nf— количество самок; Nm— количество самцов, участвующих в размножении.

Зависимость интенсивности генетико-автоматических процессов (дрейфа) от размера популяции определяется по формуле К = 1
/2
Ne, где К — доля, на которую изменяется концентрация аллеля.

Так, если на поголовье 1000 маток будут использоваться 5 быков, величина К составит 2,0 %, а при использовании одного быка К
будет равна 10 %. Особенно резко может повыситься частота мутантного аллеля в популяции, если при разведении линии генотип гетерозиготного родоначальника будет репродуцироваться с применением инбридинга, как это имело место в линии Ладка и его продолжателя Бурхана. В пяти поколениях этой линии зарегистрировано 117 телят-уродов. 3 большинстве случаев родословные отцов иматерей замыкались на трех предков — быков Бурхана, его отца Ладка и деда Салата. В ряде случаев инбридинг был комплексным — одновременно на указанных производителей или усиливающимся, что повышало вероятность перехода мутантных генов в гомозиготное состояние.

Следует иметь в виду, что при интенсивном использовании ограниченного контингента производителей в товарных хозяйствах генетическое разнообразие популяции суживается даже при своевременной ротации линий. Такое положение может привести к сочетанию родственных по генотипам (гетерозиготных носителей вредных генов) производителей и маток. С другой стороны, интенсивное кроссирование линий в племенных хозяйствах неизбежно будет приводить к стихийному родственному спариванию в товарных хозяйствах и массовому проявлению инбредной депрессии, в том числе повышению частоты уродств и аномалий в популяциях.

Инбредная депрессия может возрасти в результате миграции. Под миграцией в животноводстве понимают импорт производителей, маток или гамет (спермиев, а также яйцеклеток и эмбрионов), закупки племенных животных из других зон страны. При использовании завезенных животных в местную популяцию могут быть введены не только желательные гены, повышающие продуктивность, но и аллели, обусловливающие летальные и полулетальные аномалии. Сдвиги концентраций рецессивного аллеля q
при миграциях определяются по формуле q
= — т (qqm),
где т —
величина обмена генами, aqm
средняя концентрация аллеля по всей системе популяций, между которыми идет обмен генами, или в тон определенной популяции, откуда поступают животные (Дубинин Н. П., 1985). Из формулы видно, что величина сдвига концентраций рецессивного аллеля зависит от частоты рецессивного аллеля в исходной популяции, откуда мигрируют особи, и частоты миграции.

Случаев распространения генетических аномалий вследствие миграций известно немало. Например, в ФРГ в результате интенсивного использования на местном поголовье черно-пестрого скота отдельных быков голштинской породи, импортированных из США, резко возросла частота пупочных грыж у телят. Эту же аномалию наблюдали в потомстве двух быков голландской породы, закупленных в ЧССР из Нидерландов.

Таким образом, чтобы не допустить массового распространения наследственной патологии, необходимы проверка генотипов производителей на носительство вредных генов и исключение из интенсивного использования носителей мутации.

1.3 Профилактика распространения летальных и полулетальных аномалий у сельскохозяйственных животных

Летальные и полулетальные аномалии в основном связаны с переходом в гомозиготное состояние мутантных рецессивных генов. Это означает, что родители аномальных животных являются гетерозиготными носителями данных мутаций. Для того чтобы вредные рецессивные мутации не распространялись в конкретном стаде или породе, необходима организация генетического контроля (мониторинга) за проявлением патологии у животных.

Прежде всего в каждом стаде должна быть налажена система учета рождения уродливого и аномального приплода. На основании этого учета проводится генетический анализ для установления роли наследственности в возникновении аномалий. Такой анализ должен подкрепляться сведениями из литературы относительно этиологии данной патологии.

Если в популяции животных появляется врожденная аномалия и установлено, что она контролируется аутосомным рецессивным геном, то родителей, от которых получен аномальный потомок, и других фенотипически нормальных их потомков не оставляют для воспроизводства. Это вызвано тем, что родители являются гетерозиготными носителями рецессивной мутации и половина их нормальных потомков имеет такой же ген в гетерозиготном состоянии. Особенно недопустимо использование гетерозиготных по вредным рецессивным генам производителей в племенных хозяйствах.

Если аномалии возникают у высокопродуктивных родителей в племенных стадах, то мужских потомков целесообразно проверять на гетерозиготное носительство путем родственных спариваний. Для интенсивного использования производителей в последующем отбирают только тех из них, у которых при инбридинге не было аномального приплода. Проверка производителей по качеству потомства должна предусматривать учет не только продуктивности потомства, но и его жизнеспособности.

1.4 Влияние генетических факторов на мертворожденность и постнатальную смертность молодняка

Мертворожденность и гибель молодняка в первые дни после рождения причиняют значительный ущерб животноводству. Подсчитано, что в общем доходе, получаемом от коровы, 10 — 12 % составляет доход от теленка. Мертвыми рождаются от 1 до 10 % телят. Причины мертворождений могут быть различными. Значительную долю (около 20 %) перинатальной смертности приплода крупного рогатого скота составляют трудные отелы.

Рефераты:  Уголовное право в период Великой Отечественной войны - дипломная. Оценка - хорошо. Авторские дипломные за 30.05.2017.

На частоту мертворожденности оказывают также влияние генетические и средовые факторы, порода и методы разведения родителей.

Установлено влияние отцов на частоту мертворождений и смертности телят после рождения. Перинатальная смертность может быть связана с применением инбридинга. Например, в племзаводах «Сычевка», «Никольский» (сычевская порода) и «Пролетарий» (костромская порода) соответственно 81,4; 80,0 и 85,8 % мертвых телят родились в результате родственного спаривания. В этих хозяйствах был выделен ряд семейств и пар мать-дочь, где при родственном подборе рождались нежизнеспособные телята, а отдельные коровы неоднократно давали мертворожденный приплод. У некоторых коров после отела нежизнеспособным теленком нарушалась воспроизводительная функция. Они длительное время не приносили приплода, что приводило к их выбраковке. Другие коровы выбывали сразу после отела мертвым теленком.

При проверке производителей по качеству потомства необходимо вести строгий учет заболеваемости и смертности, а также вынужденного убоя молодняка. Быков, имеющих преимущество по ряду селекционируемых признаков, но характеризующихся повышенной смертностью потомков (более 5 %), следует использовать очень ограниченно.

Для определения генетических и средовых причин смертности приплода в товарных хозяйствах необходимо одновременно использовать сперму не одного, а нескольких производителей.

В этом случае достоверно повышенная частота смертности в потомстве определенного быка при прочих равных условиях должна рассматриваться как проявление генотипа данного производителя.

2. ГЕНЕТИЧЕСКИЕ АНОМАЛИИ И УСТОЙЧИВОСТЬ СВИНЕЙ К НЕКОТОРЫМ БОЛЕЗНЯМ

2.1 Летальные и полулетальные аномалии в популяциях свиней

Атрезия ануса (заращение анального отверстия). Встречается у особей обоего пола. Однако хрячки погибают через два-три дня после рождения, в то время как свинки иногда выживают и дают потомство. У них возможно сообщение прямой кишки с урогенитальным синусом. Аномалия наблюдается у свиней нескольких пород. Генетический анализ по выяснению ее этиологии проведен на шведских ландрасах и немецкой короткоухой породе. Предполагается моногенный рецессивный с неполной пенетрантностыо или бифакториальный тип наследования.

Паралич задних конечностей.
Зарегистрирован у различных пород свиней за рубежом и в СССР. Поросята с этим дефектом погибают через несколько дней после рождения. Наследование моногенное рецессивное.

Толстоногость.
Сильное утолщение кожи и подкожной клетчатки, хронический отек (слоновость) прежде всего передних конечностей. Наследственный рецессивный характер аномалии установлен впервые на свиньях белой длинноухой породы.

Искривление и ригидность конечностей.
Отмечаются контрактура мышц, искривление и ригидность (жесткость) одной или обеих передних конечностей. Поросята рождаются мертвыми или погибают вскоре после рождения, после судорожных подергиваний. Рецессивный тип наследования аномалии определен у шведских пород свиней.

Недоразвитие ушных раковин(микротия и анотия).
У свиней часто встречается в сочетании с расщеплениями губы и верхнего нёба («волчья пасть»), с уродствами задних конечностей. Поросята урождаются мертвыми или погибают вскоре после рождения. Аномалия описана у немецких, венгерских свиней дюрок-джерсейской породы, у тэмворсов. Наследуется по аутосомному рецессивному типу.

Гидроцефалия.
Поросята с водянкой головного мозга рождаются мертвыми или погибают на 1—2-й день. Клинические признаки аномалии такие же, как у телят. Наследование моногенное рецессивное.

Трехногие поросята (перомелия).
Агенезия периферических частей конечностей одна из распространенных аномалий у свиней. Генетические исследования показали, что перомелия наследуется как простой рецессивный признак.

Микседема.
Характерными признаками аномалии являются зобообразная припухлость шеи (толстая шея), общая отечность, но особенно на затылке (сальные поросята), укорочение конечностей. Поросята рождаются мертвыми. Нарушение функции щитовидной железы в форме микседемы одна из распространенных аномалий у свиней. По некоторым данным; 50—70% мертворождений у поросят связаны с микседемой. Причиной аномалии до недавнего времени считали недостаток иода. Однако в результате генетического анализа установлен моногенный рецессивный контроль данного признака.

Желтуха новорожденных.
Иммунологическая несовместимость эритроцитов у матери и плодов приводит к эристобластозу поросят. В возникновении аномалии основную роль играет скрещивание животных разного генотипа, иногда вместо ожидаемого эффекта гетерозиса наблюдаются мертворождения с признаками желтухи.

Гемофилия.
Неспособность крови к свертыванию. Тяжесть болезни прогрессирует с возрастом поросят. Аномалия контролируется полулетальным рецессивным геном.

Несовершенный зпителиогенез.
У новорожденных поросят наблюдаются дефекты кожи преимущественно на голове, спине, боках и конечностях. Участки с отсутствием слоев эпидермиса резко ограничены от нормальной кожи. При прикосновении они кровоточат и воспаляются. Большинство аномальных поросят погибает спустя несколько дней после рождения. Несовершенное развитие эпителия как наследственный рецессивный признак зарегистрирован у немецких белых свиней и их гибридов в беркширской и темворской породах. Следует иметь в виду, что эпителиальные дефекты у свиней могут быть вызваны недостаточностью витамина А и другими негенетическими факторами.

2.2 Хромосомные аберрации у свиней

В разных породах свиней установлено распространение реципрокных транслокаций хромосом.

Выявлены 16 различных вариантов этого типа аберраций. Для большинства из них установлено резко выраженное отрицательное влияние на плодовитость животных (табл. 12).

Таким образом, в свиноводстве большое значение имеет цитогенетический контроль, позволяющий предупреждать распространение реципрокных транслокаций. Особенно необходимо проверять кариотипы тех хряков, при использовании спермы которых регистрируют высокий процент прохолостов маток или малочисленный помет. Выявленных носителей реципрокных транслокаций следует браковать, а их приплод исключать из воспроизводства.

2.3 Устойчивость свиней к некоторым заболеваниям

У свиней установлены генетически обусловленные различия ко многим болезням инфекционной, инвазионной и незаразной этиологии. В частности, в некоторых популяциях наблюдается устойчивость к бруцеллезу, свиной лихорадке. В Швеции при массовом обследовании свиней перед убоем удалось установить, что у ландрасов намного реже встречается поражение легких, чем у йоркширов.

2.4 Реципрокные транслокации в породах свиней и их влияние на плодовитость

Большие экономические потери всвиноводстве приносит атрофический ринит вследствие задержки роста, плохой усвояемости корма, снижения плодовитости и жизнеспособности животных. По данным Д. Хамори (1983), при скрещивании клинически больных свиноматок с больными хряками лишь 71,4% первых оказались супоросными, а среди потомства 28 % были мертворожденными и 33,7%пали до отъема. Установлены межпородные различия по восприимчивости к атрофическому риниту. Датская порода ландрас и шведские белые беконные свиньи чрезвычайно восприимчивы к риниту, тогда как свиньи породы лакомб считаются резистентными к этому заболеванию.

Ученые полагают, что в дополнение к породной предрасположенности к болезни существует также семейная предрасположенность, особенно в потомстве свиноматок, которые сами чрезвычайно восприимчивы к болезни. По данным исследователей из ГДР, существует высокая корреляция между заболеваемостью у родителей и потомков (г = 0,76). По расчетам датских ученых коэффициент неследуемости атрофического ринита составил 0,17 – 0,20.

Для профилактики болезни рекомендуется выбраковывать из стада не только клинически больных, но и животных с субклинической формой атрофического ринита.

3. ГЕНЕТИЧЕСКИЕ АНОМАЛИИ И УСТОЙЧИВОСТЬ ОВЕЦ К НЕКОТОРЫМ БОЛЕЗНЯМ

Мышечная контрактура.
У новорожденных ягнят наблюдается сильное сокращение мускулатуры конечностей, подвижность суставов очень ограничена. Ягнята слаборазвитые, нежизнеспособные. Аномалия описана как летальный рецессивный признак у австралийских мериносов.

Недоразвитие ушной раковины и волчья пасть.
Овцы, лишенные ушных раковин, совершенно глухие. В отдельных случаях наблюдали сочетание безухости с расщеплением нёба. Признаки наследовались по моногенному рецессивному типу.

Адактилия.
Полное или частичное отсутствие роговой подошвы или недоразвитие копытного рога, фаланг на отдельных, чаще задних, или всех конечностях зарегистрировано у мериносныховец в Голландии, ФРГ и Франции. Тип наследования рецессивный.

Летальная серая окраска каракульских овец.
Специальные скрещивания показали, что аномалия связана с летальным действием доминантного гена в гомозиготном состоянии. В гетерозиготе этот ген обусловливает серую окраску каракуля (тип ширази), пользующуюся особым спросом на мировом рынке. ВСССР и Румынии было впервые установлено, что при скрещивании серых — гетерозиготных — каракульских овец наблюдается снижение выхода ягнят за счет ранних эмбриональных потерь или гибели ягнят через несколько недель после рождения вследствие недоразвития или полного отсутствия рубца, недостатка сычужного фермента.

Профилактика потерь молодняка в данном случае заключается в скрещивании серых овец с баранами черной или другой окраски.

Карликовость.
Аномалия возникает вследствие нарушения функции щитовидной железы — недостатка коллоида в фолликулах. Она обусловлена одним рецессивным геном. Описана умериносов.

Светочувствительность (печеночная порфирия).
Клиническое проявление аномалии наблюдается при переходе ягнят на зеленый корм в возрасте 4—б недель. На участках кожи, не покрытых шерстью, появляются воспаления и некрозы, приводящие к слепоте. Животные погибают от вторичных инфекций. Врожденная цветочувствительность как моногенный рецессивный признак описана у овец саутдаунской породы в США и Новой Зеландии.

Летальная мышечная дистрофия.
Аномалия обнаружена у австралийских мериносов. Кроме дистрофии мышц, у ягнят наблюдали искривление конечностей, позвоночника, грудины и ребер. Дефект носит летальный характер. Наследуется как моногенный рецессивный признак.

Синдром агнатии.
Аномалия характеризуется отсутствием нижней челюсти и включает изменения ротовой полости, глотки, языка, ушей, глаз и других лицевых частей головы; сопровождается непроходимостью пищевода. Этот летальный рецессивный дефект распространен у мериносовых овец Австралии.

Атрезия ануса.
Непроходимость ануса — летальный признак с моногенным рецессивным наследованием. Он причиняет значительный экономический ущерб.

Врожденное расщепление позвоночника (спина бифида).
Аномалия зарегистрирована у овец исландской породы. Сопровождается повышенной пренатальной смертностью баранчиков, более низкой живой массой при рождении. Признак является наследственной рецессивной аномалией овец.

4. ГЕНЕТИЧЕСКИЕ АНОМАЛИИ И УСТОЙЧИВОСТЬ ПТИЦ К НЕКОТОРЫМ БОЛЕЗНЯМ

Наследственные аномалии, обусловленные мутантными летальными и полулетальными генами, у птиц хорошо изучены.

Проявляются аномалии в форме изменений в строении скелета, конечностей, клюва, изменения оперения, функциональных нарушений.

Карликовость.
Среди генетических аномалий кур установлено большое разнообразие форм карликовости:

микромелия — «клюв попугая» — характеризуется укороченными и утолщенными конечностями, затруднениями при вылуплении цыплят, часто обнаруживают в породе леггорн;

хондродистрофия — укорочение трубчатых костей, «клюв попугая», а в легкой форме «клюв попугая» отсутствует, описана у красных родайлеров;

карликовость — укороченная верхняя часть клюва, перекрученные ноги, кривошея;

тиреогеиная карликовость — «клюв попугая», укорочение конечностей, пальцы выгнуты наружу;

наномелия — сильная гипоплазия конечностей, брахицефалия, «клюв попугая», гибель зародыша наступает к концу инкубации;

амеоподия — редукция ног и крыльев, зарегистрирована у леггорнов;

коротконогость — у гетерозигот отмечается укорочение конечностей, а гомозиготы погибают на 4-е сутки инкубации.

Нарушения нервной системы.
Несколько аномалий птиц связаны с нарушениями нервной системы:

атаксия — цыплята не могут стоять, кривошея, описана у ныо-гемпширов и суссексов;

Рефераты:  Индуктивное умозаключение. Реферат. Логика. 2009-01-12

врожденное дрожание — вылупившиеся цыплята дрожат, выживаемость их низкая, доминантный признак описан у леггорнов;

дрожание, или вибрирование, — отмечаются запрокидывание головы и встряхивание ею, кривошея;

трясучка — вибрирующие движения выражены не так резко, как в предыдущей форме;

сонливость — отмечаются вялость и сонливость, одышка и титанические судороги;

пароксизм — возникают угнетение роста, тетания, дрожание, последние два дефекта наследуются как сцепленные с полом аномалии.

Разные аномалии.
К наследственным уродствам относятся различные типы полидактилии (многопалости), многие из аномалий лицевых костей — отсутствие или укороченность верхней, нижней или обеих челюстей, перекрещивание челюстей и другие сочетаются с недоразвитием глаз.

Отдельные мутации обусловливают гибель во время инкубации или во время роста на 23—123-е сутки. Обнаруживают нарушение в соотношении полов, что указывает на сцепленное с Х-хромосомой наследование. Выводимость яиц или вывод цыплят при этом резко снижены.

К наследственным аномалиям птиц относят неспособность к вылуплению. У кур корнуэльской породы этот летальный фактор наследуется по доминантному типу.

Частота генетических аномалий у птиц, как и у других видов животных, резко возрастает при родственном разведении.

Роль днк-диагностики в контроле и элиминации рецессивных наследственных аномалий у сельскохозяйственных животных

8. Вейр Б. Анализ генетических данных. — М.: Мир, 1995. — 319 с.

9. Peakall, R., Smouse P.E. GENALEX 6: genetic analysis in Excel. Population genetic software for teaching and research. //. Molecular Ecology Notes, 2006, 6, 288-295. V. GENALEX 6.4 UTR: http://appliedpopulationgenetics2021.wikispaces.com/file/view/ GENALEX6.4_documntation.pdf, (дата обращения 19.12.2021).

10. Зиновьева, Н.А., Гладырь Е.А. Генетическая экспертиза сельскохозяйственных животных: применение тест-систем на основе микросателлитов //Достижения науки и техники АПК. — 2021. — № 9. — с. 19-20.

11. Гладырь Е.А., Зиновьева Н.А., Брем Г. Характеристика генофонда и выявление генеалогических связей между породами овец России с использованием ДНК-микросателлитов // Доклады Российской академии сельскохозяйственных наук. — 2004. — № 2. — С. 26.

12. Гладырь Е.А., Зиновьева Н.А., ЭрнстЛ.К., Брем Г. Генотипирование российских пород овец по микросателлитным маркерам и PRNP (гену прионового белка) // Ветеринарная патология. — 2005. — № 1. — С. 26-32.

13. Гладырь Е.А., Селионова М.И., Зиновьева Н.А. Характеристика генофонда и выявление генеалогических связей между породами овец с использованием групп крови и ДНК-микросателлитов // Овцы, козы, шерстяное дело. — 2007. — № 4. -С. 19-24.

14. Левонтин Р. Генетические основы эволюции. — М.: Мир, 1978. — 352 С.

15. Nei M. Estimation of average heterozygosity and genetic distance from a small number of individuals // Genetics. — 1978. -89: 583-590.

THE ALLELE POOL CHARACTERISTICS OF THE SHEEP BREEDS FROM THE SOUTH OF RUSSIA E.A. Gladyr, N.A. Zinovieva, S.S. Burylova, M.I. Selionova, L.G. Moiseykina, L.K. Ernst, G. Brem

Summary. Using 11 microsatellite markers (HSC, OarAE119, OarCP49, OarFCB11, MAF214, MCM42, TGLA53, MAF65, McM527, INRA49, OarFCB20) as the instrument the allele pool characteristic of three fine-wooled sheep breeds of the South of Russia (Stav-ropolskaja, Groznenskaja, Soviet Merinos) was done. The studied sheep breeds were characterized by high degree of genetic diversity: the average number of alleles per microsatellite loci was 10.4-12.3. The average number of effective allele per loci is varied of 5.4 in Groznenskaja breed to 7.7 in Stavropolskaja breed. In total seventy six privet alleles were identified including 36 alleles in Stavropolskaja breed, 17 — in Groznenskaja breed and 23 — in Soviet Merinos. Five breed specific alleles were identified including four in Stavropolskaja breed — 122 allele of Oar FCB11 loci, 225 allele of MAF214 loci, 138 and 149 alleles of TGLA53 loci and one in Soviet Merinos — 87 allele of OarCP49 loci. The observed heterozygote degree is varied of 0.510±0.041 in Stavropolskaja breed to 0.678±0.035 in Soviet Merinos. The different contribution of loci into heterozygote degree was observed which varied of 0.281 for HSC loci to 0.967 for TGLA53 loci. The heterozygote deficiency and positive Fis value (from 0.148 to 0.401) were detected in all breeds analyzed. The calculation of Fst value showed that 95.7 per cent of diversity was due to within breed differences and only 4.3 per cent was due to intra breed differences. The analysis of genetic consolidation degree showed that 100 per cent animals were assigned to own population. The structure of phylogenetic tree was in accordance with the historical aspects of breeds’ origins.

Key words: sheep, microsatellites, genetic diversity, allele pool.

УДК 575.174.015.3:636.082.2

РОЛЬ ДНК-ДИАГНОСТИКИ В КОНТРОЛЕ И ЭЛИМИНАЦИИ РЕЦЕССИВНЫХ НАСЛЕДСТВЕННЫХ АНОМАЛИЙ У СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ*

H.A. ЗИНОВЬЕВA, академик PAСXН, директор E.A. ГЛAДЫPЬ, кандидат биологических наук, зав. лабораторией

О.В. KОСТЮНИНA, кандидат биологических наук, ведущий научный сотрудник

В.Р. XAPЗИНОВA, кандидат биологических наук, старший научный сотрудник

М.В. ПОKPОВСKAЯ, кандидат биологических наук, ведущий научный сотрудник ВИЖ Россельхозакадемии

Н.Г. ДPУШЛЯK, кандидат биологических наук, старший научный сотрудник Орловский ^У

ЯЛ. ^БИЦ^Я, младший научный сотрудник

Тюменская ГСXA

E-mail: n_zinovieva@mail.ru

Резюме. Проанализирована база данных наследственных аномалий OMIA. Из 79 наследственных дефектов крупно-

го рогатого скота и 18 наследственных дефектов свиней, охарактеризованных на молекулярном уровне, определены селекционно-значимые генетические аномалии, требующие проведения мониторинга в популяциях племенного скота России. Приведены результаты многолетних исследований (2005-2021 гг.) по идентификации мутантных аллелей в генах SLC35A3, ^В2, ЕХІ и SLC39A4 крупного рогатого скота, обусловливающих соответственно такие наследственные заболевания, как комплексный порок позвоночника, дефицит лейкоцитарной адгезии, дефицит фактора свертывания крови XI и дефицит цинка, а также в генах RYR1, PRKAG3 и SPEF2 свиней, обусловливающих злокачественную гипертермию, синдром «кислое мясо» и ISTS-синдром. При проведении исследований использовали собственные молекулярно-генетические тест-системы, основанные на методах ПЦР, ПЦР-ПДРФ анализа и пиросеквенирования. Определены частоты встречаемости животных — носителей мутантных аллелей названных генов в популяциях крупного рогатого скота голштинской и чернопестрой пород и свиней различных пород в организациях по племенному животноводству России, которые составили для SLC35A3 — 2,06 %, ^В2 — 1,81 %, ЕХІ — 0,00 %, SLC39A4 —

0,00 %, RYR1 — 2,11 %, PRKAG3 — 0,00 % и SPEF2 — 1,17 %.

*Работа выполнена при финансовой поддержке Министерства образования и науки РФ, шифр 2021-1.4-12-000-1001-010 и 2021-1.4-12-000-1016-008. В проведении исследований использовано оборудование ЦКП «Биоресурсы и биоинженерия сельскохозяйственных животных» ГНУ ВИЖ Россельхозакадемии.

Носители мутантного аллеля ЙУЙ1 идентифицированы во всех основных породах свиней, используемых в промышленном производстве свинины: 1,97 % у пород крупная белая и йоркшир (п=1920), 1,49 % уландрасов (п=160б), 2,97 % у дюроков (п=437) и 10,00 % у пьетренов (п=50). На примере генов SLC35A3 и ^В2 показана эффективность ДНК-диагностики в контроле и снижении распространения наследственных генетических дефектов в популяциях племенного скота. Ключевые слова: крупный рогатый скот, свиньи, наследственные дефекты, дНк-диагностика.

Генетическое совершенствование пород сельскохозяйственных животных предусматривает международный обмен генофондом с целью использования лучших мировых селекционных достижений. Однако завоз племенного материала из-за рубежа сопряжен с неконтролируемым появлением и распространением наследственных аномалий, способных нанести существенный вред развитию животноводства и поставить под угрозу биологическую безопасность страны [1].

Наиболее крупная на сегодня база данных, содержащая информацию о наследственных дефектах 186 видов животных, — OMIA Университета Сиднея [2]. Она содержит фенотипическое описание 398 наследственных аномалий крупного рогатого скота и 214 аномалий свиней, в том числе соответственно 145 и 45 аномалий, обусловленных изменениями в одном локусе, из которых 79 и 18 наследственных дефектов описано на молекулярном уровне.

Для элиминации рецессивных наследственных аномалий в популяциях сельскохозяйственных животных необходима разработка и освоение систем ДНК-идентификации животных — носителей мутантных аллелей. Такие системы разработаны в Центре биотехнологии и молекулярной диагностики ВИЖ Россель-хозакадемии для большинства селекционно-значимых наследственных дефектов [1, 3, 4].

Цель представленной работы характеристика распространения наследственных аномалий и оценка влияния освоения ДНК-диагностики на элиминацию наследственных дефектов в популяциях крупного рогатого скота и свиней.

Условия, материалы и методы. Материалом для исследований послужили пробы ткани (ушной выщип, кровь, сперма) крупного рогатого скота голштинской черно-пестрой и черно-пестрой пород, свиней пород крупная белая, йоркшир, ландрас, дюрок, пьетрен, боди, белорусская мясная, крупная черная, ливенская. Выделение ДНК выполняли по общепринятым методикам [5]. Идентификацию точечных мутаций в генах SLC35A3 и ITGB2 осуществляли методами ПЦР-ПДРФ анализа и пиросеквенирования, SLC39A4 и RYR1 -ПЦР-ПДРФ анализа, PRKAG3 — пиросеквенирования, идентификацию инсерций в генах FXI и SPEF2 — ПЦР анализа с использованием двух пар праймеров по методикам Центра биотехнологии и молекулярной диагностики ВИЖ Россельхозакадемии. Статистическую обработку результатов проводили по стандартным методам [6] с использованием программного обеспечения MS Excel.

Результаты и обсуждение. Анализ материалов базы данных, а также литературных источников позволил определить перечень селекционно-значимых наследственных дефектов, требующих проведения мероприятий по их элиминации в популяциях голштинского и голштинизированного крупного рогатого скота [7…12] и свиней [13…15] в России (табл. 1).

Мы установили, что скрытые носители наследственных аномалий встречались с относительно низкой

Таблица 1. Селекционно-значимые наследственные дефекты крупного рогатого скота и свиней

Вид Ген (ID*) Мутация (позиция) Наследственный дефект

Крупный SLC35A3 G^T Комплексный порок по-

рогатый (23443) (180) звоночника, СУМ (IV —

скот не носители, СУ — носители)

ITGB2 A^G Дефицит лейкоцитар-

(281877) (383) ной адгезии, BLAD (Т1_ — не носители, BL -носители)

FXI b 6 7 s In Дефицит фактора XI,

(407998) (Экзон 3) FXID

SLC39A4 T^C Наследственный дефи-

(510951) (Интрон10)цит цинка, BHZD

Свиньи PRKAG3 G^A Синдром «кислое

(397149) (200) мясо», RN-

RYR1 C^T Злокачественная ги-

(396718) (1843) пертермия, МН

SPEF2 Ins9,0kb Дефект неподвижных

(733620) (Интрон 30) короткохвостых сперматозоидов, 1818

Идентификационный номер гена в базе данных ОМ1А, Del — делеция, 1пэ — инсерция, Ьр — пары оснований, кЬ — тысячи пар оснований.

частотой: у крупного рогатого скота от 0,0 % по FXID и ВН7й до 2,06 % по СУМ, у свиней — от 0,00 % по ЯЫ- до 2,11 % до МН (табл. 2).

Если в молочном скотоводстве основные породы, обеспечивающие производство молока в России, — голштинская черно-пестрая и черно-пестрая породы, то в свиноводстве промышленное производство мяса базируется на использовании животных нескольких пород: крупная белая (йоркшир), ландрас, дюрок и, в меньшей степени, пьетрен. Наследственный синдром ЯЫ- не был идентифицирован среди исследованного племенного поголовья свиней, а ^ТБ-синдром — специфический наследственный дефект для пород корня крупной белой (крупная белая и йоркшир). Однако скрытые носители МН были выявлены во всех изученных основных породах свиней. Их доля у животных пород крупная белая и йоркшир (п=1920) составила 1,97 %, ландрас (п=1606) — 1,49 %, дюрок (п=437) — 2,97 % и пьетрен (п=50) — 10,00 %. Кроме того, среди свиней породы пьетрен было идентифицировано 6,0 % гомозиготных носителей МН, отсутствующих в других породах. Учитывая широкое использование искусственного осеменения, как в скотоводстве, так и в свиноводстве, использование в воспроизводстве даже одного скрытого носителя может привести к распространению наследственного дефекта в популяции.

Рефераты:  Автоматизированные системы лечебно-профилактических учреждений. Реферат. Информационное обеспечение, программирование. 2012-02-02

Примером успешного контроля и элиминации наследственных заболеваний благодаря освоению

Таблица 2. Распространение наследственных аномалий в популяциях крупного рогатого скота и свиней России

Вид животных Наслед- ственный дефект*** Исследовано голов, n Выявлено скрытых носителей, %

Крупный CVM 3149 2,06

рогатый BLAD 2326 1,81

скот* FXID 420 0,00

BHZD 235 0,00

Свиньи** RN- 2021 0,00

MH 4260 2,11 (0,09****)

ISTS 511 1,17

* использованы данные по быкам-производителям и ремонтным бычкам племенных предприятий и племенных заводов России; ** использованы племенные хряки и свиноматки; ***расшифровка аббревиатуры приведена в таблице 1; ****в том числе гомозиготных носителей.

в систему искусственного осеменения спермы быков — потомков завезенных в страну племенных нетелей, скрытых носителей этого наследственного дефекта. К 2021 г. распространение скрытых носителей СУМ уменьшилось до 0,30 %. Среди исследованных за 9 мес. 2021 г. 283 быков животных СУ не выявлено.

Доля скрытых носителей BLAD в 2005-2009 гг. находилась на уровне 2,13… 2,53 % (см. рисунок, Б), после чего наблюдается ее снижение до 0,71.1,04 % в 2021-2021 гг. и элиминация в 2021 г. (у 248 исследованных за 9 мес. 2021 г. животных BL не диагностировано).

Выводы. Таким образом, частоты встречаемости животных — носителей мутантных аллелей генов, обусловливающих наследственные заболевания, в популяциях российских организаций по племенному животноводству крупного рогатого скота голштинской и черно-пестрой пород составляют для SLC35A3 — 2,06 %, 1ТОВ2 -1,81 %, свиней различных пород — для ЯУЯ1 — 2,11 % и SPEF2 — 1,17 %. Носители мутантного аллеля ЯУЯ идентифицированы во всех основных породах свиней, используемых в промышленном производстве свинины: 1,97 % у пород крупная белая и йоркшир (п=1920), 1,49 % у ландрасов (п=1606), 2,97 % у дюроков (п=437) и 10,00 % у пьетренов (п=50). В изученных популяциях не обнаружены животные с наследственными дефектами FXID, BHZD крупного рогатого скота и ЯЫ свиней. Пример использования ДНК-диагностики для контроля и снижения распространения наследственных генетических дефектов СУМ и BLAD в популяциях племенного скота свидетельствует об эффективности этого метода.

(А) и BLAD (Б) среди быков- доля BL, % (Б); * — за

Рисунок. Частота встречаемости скрытых носителей CVM

производителей: I—-1 — исслед. быков; — доля CV, % (А);

9 мес. 2021 г.

ДНК-диагностики могут служить комплексный порок позвоночника (CVM) и дефицит лейкоцитарной адгезии (BLAD). Например, в 2005 и 2006 гг. мутантный аллель SLC35A3, обусловливающий CVM, был выявлен, соответственно, у 5,06 и 5,71 % быков (см. рисунок, А), после чего распространение этой наследственной аномалии снизилось до 2,25 % в 2007 г. и 0,61 % в 2008 г. Некоторое повышение доли скрытых носителей CVM в 2009 и 2021 гг. до 2,74 и 1,66 % соответственно, по всей видимости, связано с поступлением

Литература.

1. Гладырь Е.А., Зиновьева Н.А., ЭрнстЛ.К., Костюнина О.В., Быкова А.С., Банникова А.Д., Кудина Е.П., Брем Г. Молекулярные методы в диагностике заболеваний и наследственных дефектов сельскохозяйственных животных // Зоотехния. -2009. — № 8. — с. 26-27.

2. Интернет ресурс: http://omia.angis.org.au/home.

3. ЭрнстЛ.К., Гладырь Е.А., Горелов П.В., Демидова Е.Н., Шайдуллин Р.Р., Зиновьева Н.А. Характеристика региональных популяций быков-производителей по генам наследственных заболеваний // Достижения науки и техники АПК. — 2021. -№ 10. — с. 28-30

4. Марзанов Н.С., Фролкин Д.А., Зиновьева Н.А., Попов А.Н., Данилин А.В., Брем Г. RYR1-ген у свиней отечественных и зарубежных пород //Доклады рАСХН. — 2001. — № 1. — с. 34-36.

5. Зиновьева Н.А., Гладырь Е.А., ЭрнстЛ.К., Брем Г. Введение в молекулярную генную диагностику сельскохозяйственных животных. — ВИЖ, 2002. — 112 с.

6. Меркурьева Е.А., Абрамова З.В., БакайА.В. Генетика. — М.: Агропромиздат, 1991. — 446с.

7. Dennis J.A., Healy P.J., Beaudet A.L., O’Brien W.E. Molecular definition of bovine argininosuccinate synthetase deficiency // Proc Natl Acad Sci USA. — 1989. — 86 (20). — 7947-7951.

8. Shuster D.E., Bosworth B.T., Kehrli M.E. Sequence of the bovine CD18-encoding cDNA: comparison with the human and murine glycoproteins // Gene. — 1992. — 114 (2). — 267-271.

9. Schwenger B., Schober S., Simon D. DUMPS Cattle Carry a Point Mutation in the Uridine Monophosphate Synthase Gene // Genomics. — 1993. — 16. — 241-244.

10. Marron B.M., Robinson J.L., Gentry P.A., Beever J.E. Identification of a mutation associated with factorXI deficiency in Holstein cattle //Animal Genetics. — 2004. — 35. — 454-456.

11. Yuzbasiyan-Gurkan V., Bartlett E. Identification of a unique splice site variant in SLC39A4 in bovine hereditary zinc deficiency, lethal trait A46: An animal model of acrodermatitis enteropathica //Genomics. — 2006. — Oct. — 88(4). — 521-526.

12. Charlier C., Agerholm J.S., Coppieters W., Karlskov-Mortensen P., Li, W., de Jong G., Fasquelle C., Karim L., Cirera S., Cambisano N., Ahariz N., Mullaart E., Georges M., Fredholm M. A deletion in the Bovine FANCI Gene Compromises Fertility by Causing Fetal Death and Brachyspina //PLoS One. — 2021. — 7(8). — e43085.

13. Fujii J., Otsu K., Zorzato F., Deleon S., Khanna V.K., Weiler J.E., Obrien, P.J., Maclennan D.H. Identification of a Mutation in Porcine Ryanodine Receptor Associated with Malignant Hyperthermia // Science. — 1991. — 253. — 448-451.

14. Milan D., Jeon J.T., Looft C., Amarger V., Robic A., Thelander M., Rogel-Gaillard C., Paul S., Iannuccelli N., Rask L., Ronne H., Lundstrom K., Reinsch N., Gellin J., Kalm E., Le Roy P., Chardon P., Andersson L. A mutation in PRKAG3 associated with excess glycogen content in pig skeletal muscle // Science. — 2000. — 288. — 1248-1251.

15. Sironen A., Thomsen B., Andersson M., Ahola V., Vilkki J. An intronic insertion in KPL2 results in aberrant splicing and causes the immotile short-tail sperm defect in the pig // Proc Nat Acad Sci. — 2006. -103. — 5006-5011.

ROLE OF DNA DIAGNOSTICS IN THE CONTROL AND ELIMINATION OF THE RECESSIVE INHERITED DISORDERS IN FARM ANIMALS N.A. Zinovieva, E.A. Gladyr, O.V. Kostjunina, V.R. Kharzinova, M.V. Pokrovskaja, N.G. Drushljak, Y.A. Kabitskaja

Summary. The analysis of the OMIA — database of inherited disorders in animals was carried out. Out of seventy nine inherited disorders in cattle and eighteen inherited disorders in swine described on molecular level the important genetic abnormalities for the introduction into the breeding programs of the Russian cattle and pig populations were selected. The results of the long-term studies (the years of 2005 to 2021) of the mutant alleles identification in the SLC35A3, ITGB2, FXI and SLC39A4 genes caused respectively the heredity diseases complex vertebral malformation, bovine leukocyte adhesion deficiency, blood factor XI deficiency and bovine hereditary zinc deficiency in cattle and in RYR1, PRKAG3 and SPEF2 genes caused respectively heredity disease malignant hyperthermia, “acid meat” syndrome and ISTS syndrome in pigs were presented. The analysis were performed using own molecular genetic test-systems based on application of PCR, RFLP and parasequencing methods. The frequencies of animals carrying the mutant alleles of the genes specified above in Russian Holstein and Black and White cattle and different pig breeds populations of breeding farms were determined: 2.06 per cent for SLC35A3, 1.81 per cent for ITGB2, 0.00 per cent for FXI, 0.00 per cent for SLC39A4, 2.11 per cent for RYR1, 0.00 per cent for PRKAG3 and 1.17 per cent for SPEF2. The carriers of the mutant allele of RYR1 gene were identified in all main pig breeds used in industrial pork production: 1.97 per cent in the Large White and Yorkshire breeds (n=1920), 1.49 per cent in Landrace (n=1606), 2.97 per cent in Duroc (n=437) and 10.00 per cent in Pietraen (n=50). On example of SLC35A3 and IGTB2 genes the DNA diagnostics efficiency in the control and elimination of inherited disorders in Russian breeding animals’ populations was shown.

Key words: cattle, pig, inherited disease, DNA diagnostics.

УДК 636.2.082.233.033

ПРОДЛЕНИЕ ПРОДУКТИВНОГО ДОЛГОЛЕТИЯ МЯСНЫХ КОРОВ ДО 8 ОТЕЛОВ И БОЛЕЕ

Г.П. ЛЕГОШИН, доктор сельскохозяйственных наук, зав. лабораторией

Л.М. ПОЛОВИНКО, кандидат сельскохозяйственных наук

М.Ю. ПОЛОВИНКО, соискатель

ВИЖ Россельхозакадемии

Е.Д. КУЩ, кандидат сельскохозяйственных наук

Племзавод «Дружба»

В.С. БУРКА, кандидат сельскохозяйственных наук Племзавод «Зимовниковский»

E-mail: vijLegoshin@yandex.ru

Резюме. Исследования проводили с целью обоснования повышения продуктивного долголетия и пожизненной продуктивности мясных коров, имеющих определяющее значение для зоотехнической и экономической эффективности мясного скотоводства. Два опыта в период с 2000 до 2021 гг. на четырех гуртах (всего более 770 гол.) коров калмыцкой породы проводили в племзаводах «Зимовниковский» Ростовской

области и «Дружба» Ставропольского края. В соответствии с методикой изучали продуктивность и воспроизводительные способности коров за жизнь, причины выбраковки и сохранность телят в гуртах неизменного состава под влиянием разных сроков начала продуктивного использования животных. В обоих хозяйствах применялась малозатратная интенсивно-пастбищная технология без капитальных животноводческих помещений. За 9 лет использования, начиная с первого отела, в гуртах неизменного состава в племзаводах «Зимовниковский» и «Дружба» соответственно продуктивное долголетие коров составило в среднем 7,94 и 8,51 отелов, межотельный интервал — 379,7 и 381,8 дн., продукция в виде живой массы отнятых телят — 1828 и 1900 кг за жизнь коровы. Это соответствует лучшим показателям стран с развитым мясным скотоводством (США, Канада, Австралия, Англия) и в 1,5-2 раза выше, чем в среднем по России. Коровы калмыцкой породы при правильном выращивании и достижении к случке 65…70 % живой массы взрослыхживотных способны иметь первый отел в возрасте около 24 мес., продуктивное долголетие не менее 7,79 отелов, массу отнятых телят 1434 кг и межотельный интервал 377,8дн. В длительных опытах обо-

Оцените статью
Реферат Зона
Добавить комментарий